Diagnóstico Sindrómico
en Infecciones de Pacientes VIH
DOCUMENTO PARA USO CLÍNICO
BOLETÍN TÉCNICO
CONTENIDO
1. INTRODUCCIÓN
La División Internacional LatAm de bioMérieux se complace en entregar este boletín técnico, con un enfoque integral en el diagnóstico del Virus de la Inmunodeficiencia Humana (VIH), una de las epidemias más graves que impacta la salud pública a nivel mundial.
Desde el inicio de la epidemia del VIH, la Región de las Américas ha contribuido con un enfoque de salud pública y derechos humanos a la respuesta mundial al VIH. Durante la 75.ª Asamblea Mundial de la Salud, los Estados Miembros tomaron nota con reconocimiento de las nuevas Estrategias mundiales del sector de la salud contra el VIH, las hepatitis víricas y las infecciones de transmisión sexual para el periodo 2022-2030, respectivamente, y aprobaron su implementación. Estas estrategias pretenden promover una respuesta acelerada, focalizada, más eficaz, innovadora y respuesta sostenible, allanando el camino hacia el objetivo de poner fin a las epidemias de sida, ITS y hepatitis víricas como problemas de salud pública en la Región de las Américas para 2030.
Fuente: https://www.paho.org/es/temas/vihsida
Datos clave VIH en Latinoamérica
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Se estima que el número de nuevas infecciones por VIH en América Latina ha aumentado un 9% de 2010 a 2023, con aproximadamente 120.000 nuevas infecciones en 2023. Del 2010 al 2023, el Caribe tuvo una reducción del 22%, pasando de un estimado de 19.000 nuevos casos a 15.000 por año.
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La epidemia de VIH en la Región afecta desproporcionadamente a ciertas subpoblaciones (poblaciones clave), incluidos los hombres que tienen relaciones sexuales con hombres (HSH), las mujeres transgénero y las trabajadoras sexuales. Según las últimas estimaciones de 2021, en América Latina, estas tres poblaciones clave representan más de la mitad de las nuevas infecciones, y en el Caribe suponen casi la mitad de las nuevas infecciones.
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En 2023 había 4 millones de personas con VIH en las Américas, de las cuales unos 2,7 millones vivían en América Latina y el Caribe.
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En América Latina, el número de personas que mueren por causas relacionadas con el SIDA ha disminuido de 42 mil en 2010 a 30 mil en 2023, mientras que en el Caribe disminuyó de 12 mil a 5.100 en el mismo periodo.Se estima que alrededor del 12% de las personas con VIH en América Latina y el Caribe desconocen su infección. Aproximadamente un tercio se diagnostica tarde, con inmunodeficiencia avanzada (menos de 200 CD4 por mm3 de sangre).
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Aproximadamente 1,7 millones de personas que viven con el VIH estaban recibiendo tratamiento antirretroviral en América Latina y 240 mil en el Caribe a finales de 2023, lo que representa una cobertura de tratamiento antirretroviral del 73% de todas las personas que se estima viven con el VIH en América Latina y del 70% en el Caribe.
Situación del VIH en las Américas
Este boletín proporciona información sobre la solución integral con la cual bioMérieux lo apoya para el diagnóstico de VIH, infecciones oportunistas y seguimiento del tratamiento.
2. DIAGNÓSTICO DE LABORATORIO DE LA INFECCIÓN POR VIH
En el curso de la infección por VIH se pueden utilizar varios marcadores víricos para identificar la infección y monitorizar su tratamiento. El primer marcador que aparece tras la infección es el ARN-VIH que se puede detectar por técnicas de amplificación aproximadamente a las dos semanas de la infección, generalmente a los 10-12 días. Prácticamente al mismo tiempo que el ARN-VIH, se puede detectar el ADN de VIH integrado en el genoma celular (ADN proviral). El antígeno p24 aparece en suero a los 11-13 días, y se puede detectar, con las técnicas de máxima sensibilidad, aproximadamente durante 1 mes y medio. Los anticuerpos se detectan en el suero a las tres o cuatro semanas de la infección, con una media de 22 días, y alcanzan su concentración máxima de las 10-12 semanas.
Cuando aparecen los anticuerpos, disminuyen los niveles de viremia y desaparece el antígeno p24 como consecuencia de la formación de inmunocomplejos. El intervalo de tiempo que existe entre la infección y la aparición de anticuerpos o seroconversión, se conoce como período ventana, y se caracteriza por presencia de ADN proviral, ARN-VIH, antígeno p24 y ausencia de anticuerpos específicos (Parker 2017, García 2011).
Las técnicas de primera generación usaban como base antigénica un lisado vírico, y se detectaban los anticuerpos a los 40 días de la infección. Las técnicas de segunda generación incorporaron como antígenos proteínas recombinantes y péptidos sintéticos, nuevos antígenos que permitieron detectar anticuerpos frente a todos los subtipos M, los grupos N y O. Frente a VIH-2 se detectaban los anticuerpos de 33 a 35 días tras la infección. Las técnicas de ELISA “en sándwich”, de tercera generación, detectan anticuerpos de clase IgG e IgM, y por ello se acorta el período ventana a 22 días. Estas técnicas se han modificado utilizando sustratos fluorescentes (ELFA). Posteriormente se introducen las técnicas de cuarta generación que permiten la detección simultánea de anticuerpos y antígeno p24, reduciéndose el período ventana de 13-15 días, es decir, se aproxima casi a la detección de ARN-VIH4. Con estas técnicas la sensibilidad se incrementa hasta un 99,9% lo que reduce la posibilidad de un resultado falsamente negativo (Parker 2017, García 2011).
Un resultado negativo para VIH no requiere confirmación ni seguimiento serológico, excepto en personas con alto riesgo de adquirir la infección. Hay que tener en cuenta, que se pueden producir falsos negativos en; fases iniciales de la infección hasta que se produce la seroconversión, estadios finales de la misma, pacientes con tratamiento inmunosupresor, trasplantados de médula ósea, personas con alteraciones de linfocitos B, en pacientes con hipogammaglobulinemia, infectados por tipos de VIH no detectados por la base antigénica, o por un error en la identificación de la muestra.
Figura 1. Tiempo de aparición de marcadores específicos de infección VIH
El incremento de la sensibilidad conlleva a un descenso de la especificidad (produciendo falsos positivos), aunque las técnicas actuales tienen especificidad alrededor del 99%. Se pueden producir falsos positivos como consecuencia de reconocimientos no específicos de sustancias del suero por los antígenos víricos de la base antigénica. Los factores que pueden estar implicados en la falsa reactividad son la base antigénica utilizada, la inactivación de las muestras por calor, los errores en la identificación de las mismas, la hemólisis, aspecto lipídico y contaminación microbiana del suero.
Se han descrito falsos positivos en multíparas, hemodializados, multitransfundidos, pacientes con hepatitis alcohólica, personas con infecciones agudas por otros virus como herpes y hepatitis B (VHB), vacunados frente a VHB e Influenza, pacientes con enfermedades autoinmunes, lupus eritematoso diseminado y personas con anticuerpos frente a diversos antígenos HLA. Por ello, todo resultado positivo debe ser confirmado mediante un test confirmatorio.
PRUEBAS DIAGNÓSTICAS BIOMÉRIEUX
El diagnóstico de una infección por VIH se basa rutinariamente en la detección de anticuerpos séricos anti-VIH específicos por técnica ELISA, ya que estos se encuentran en el suero prácticamente en el 100% de las personas infectadas.
VIDAS® HIV DUO AG/AB
cuarta generación AVANZADA
Referencia 424480
La nueva versión del ensayo VIDAS® HIV de 4ª generación para la detección combinada de inmunoglobulinas totales anti-VIH-1 (grupos M y O) y anti-VIH-2 y del antígeno p24 del VIH-1. Esta nueva prueba, con aprobación IVDR, cuenta con una doble señal diferenciada en antígenos y anticuerpos, al tiempo que garantiza resultados en menos de 90 minutos como lo ofrece la prueba VIDAS® HIV DUO QUICK ref. 30447.
Para más información, consulte con su distribuidor autorizado.
Figura 3. HIV DUO ULTRA (HIV5). Cuarta generación Avanzada
La detección combinada del antígeno p24 y de los anticuerpos anti-VIH-1 y anti VIH-2 permite reducir el plazo existente entre el contagio y el diagnóstico de la infección. VIDAS HIV DUO Ultra es una prueba automatizada basada en la detección combinada del antígeno p24 de VIH-1 y de las inmunoglobulinas totales anti-VIH-1 y anti- VIH-2 lo cual permite reducir el periodo de ventana serológica con una especificidad del 99.88%. El resultado se puede ver por separado para el antígeno y el anticuerpo.
La parte superior del cono permite la detección del Ag p24, gracias a una sensibilización por anticuerpos monoclonales anti-p24. La parte inferior del cono permite la detección de los anticuerpos anti-VIH-1 y anti-VIH-2: está sensibilizada por una proteína gp160 de VIH-1 y por péptidos de síntesis específicos del VIH-1 grupo O y del VIH-2.
Figura 3. HIV DUO ULTRA (HIV5). Cuarta generación Avanzada
Tabla 2. Pruebas diagnósticas Sistema VIDAS
MONITOREO INMUNOLÓGICO
EN PACIENTES
CON VIH
El monitoreo biológico de la infección por VIH se basa esencialmente en el conteo del número de linfocitos CD4 + y la medición de la carga viral (cuantificación del ARN viral plasmático). Estas pruebas se realizan cada 6 meses si el recuento de CD4 es > 500 / mm3 y cada 3 a 4 meses si el recuento de CD4 está entre 200 y 500 / mm3. Para adultos, adolescentes y niños ≥ cinco años, la enfermedad avanzada por VIH se define como un recuento de células CD4 <200 células / mm3 (WHO,2017).
Las directrices de la OMS recomiendan un umbral de iniciación de la terapia antirretroviral (TAR) de CD4 ≤350 células/mm3 para todos y TAR para ciertas personas que viven con VIH independientemente del recuento de CD4 (incluidas las embarazadas) mujeres y miembros de parejas sero-discordantes. El TAR debe iniciarse en todos los adultos que viven con VIH, independientemente de la etapa clínica y de cualquier recuento de células CD4 (WHO 2014 y 2017).
La carga viral plasmática se mide mediante pruebas cuantitativas basadas en herramientas moleculares de amplificación génica, entre las más usadas se encuentran la reacción en cadena de la polimerasa (PCR, por su sigla en Inglés) y la amplificación basada en la secuencia de ácido nucleico (NASBA, por su sigla en Inglés).
La mayoría de las técnicas tienen una sensibilidad del orden de 50-100 copias/ml. Para facilitar comparaciones, los resultados generalmente se expresan en log10 (ejemplos: 100 copias/ml = 2 log10, 10,000 copias/ml = 4 log10). Debido a las fluctuaciones biológicas y la reproducibilidad de estas técnicas, solo una variación de 0.5 log10 es significativa.
CARGA VIRAL VIH
El monitoreo de la efectividad de la terapia antirretroviral TAR garantiza que los pacientes puedan beneficiarse de una mejor calidad de vida a través de una terapia bien adaptada. Según las recomendaciones de la OMS la carga viral, es el estándar de oro para monitorear la respuesta al TAR en entornos de altos ingresos, se reconoce cada vez más como una herramienta importante y precisa para manejar el TAR como una forma de diagnosticar la mala adherencia y fracaso del tratamiento temprano, ya que los criterios clínicos o inmunológicos no son suficientes para definir una falla terapéutica debido a su baja sensibilidad (WHO, 2014).
Recomendaciones de la OMS para el control de los pacientes que reciben TAR
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Se recomienda la carga viral como el enfoque de monitorización preferido para diagnosticar y confirmar el fracaso del tratamiento (fuerte recomendación) (WHO 2014, Günthard 2016).
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Si la carga viral no está disponible de forma rutinaria, se debe utilizar el recuento de CD4 y la monitorización clínica para diagnosticar el fracaso del tratamiento. (recomendación fuerte) (WHO 2014).
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La carga viral debe analizarse después de iniciar TAR (a los 6 meses) y luego al menos cada 12 meses para detectar fracaso del tratamiento (WHO 2014 y 2017).
La supresión virológica se espera que ocurra dentro de las 24 semanas después de iniciar el tratamiento antirretroviral. El nivel de ARN del VIH debe controlarse cada 4 a 6 semanas después de iniciado el tratamiento o cuando ha habido un cambio en el tratamiento hasta que sea indetectable, generalmente por debajo de 20 a 50 copias / mL (Günthard, 2016). Después de lograr la supresión, el ARN del VIH debe controlarse cada 3 meses hasta que se haya mantenido la supresión durante 1 año y al menos cada 6 meses para los pacientes adherentes que permanecen clínicamente estables (Günthard, 2016).
FRACASO TERAPÉUTICO
El fracaso del tratamiento se define por una carga viral persistentemente detectable superior a 1000 copias/ml (es decir, dos mediciones consecutivas de la carga viral dentro de un intervalo de tres meses, con soporte de adherencia entre las mediciones) después de al menos seis meses de usar TAR. La prueba de carga viral generalmente se realiza en plasma; Sin embargo, se puede utilizar otro tipo de muestras como sangre en papel filtro (WHO 2014 y 2017).
Cuando se presente el fracaso terapéutico verifique factores propios del esquema potencialmente relacionados con falla virológica, como su potencia, definida como la rapidez con la cual la carga viral disminuye, la concentración mínima viricida de los medicamentos incluidos en el mismo y la durabilidad del esquema (WHO 2014 ).
Realice la prueba de resistencia cuando la carga viral de VIH sea mayor de 1.000 copias/ ml y el paciente esté recibiendo tratamiento antirretroviral, analice con todos los genotipos disponibles y con la historia de medicamentos antirretrovirales (Ministerio de Salud y Protección social, 2014). Si no se logra la supresión a las 24 semanas, se debe solicitar la evaluación de la falla virológica (Günthard, 2016).
Aunque cualquier virus detectable se ha asociado con el rebote viral en algunos estudios, no se ha comprobado que el ARN del VIH entre 20 y 50 copias / ml aumente el riesgo de virología. Los datos son inconsistentes sobre los efectos a largo plazo del ARN persistente del VIH entre 50 y 200 copias / ml. Estos pacientes deben ser reevaluados por causas de falla virológica, dentro de las 4 semanas, y monitoreado de cerca. Las decisiones para cambiar la terapia debe ser individualizada en función de las opciones de TAR, historial de resistencia y circunstancias clínicas (Günthard, 2016).
DIAGNÓSTICO INFANTIL
Aunque la carga viral no es catalogada como una prueba diagnóstica, se utiliza para el diagnóstico de bebés expuestos al VIH a las 4-6 semanas de edad junto con otras pruebas virológicas. En niños no tratados con VIH, la replicación viral es alta, y el ácido nucleico del VIH (ARN y ADN) y el antígeno p24 son por lo tanto, fácilmente detectable al principio. A las seis semanas de edad, casi todos los bebés infectados antes del nacimiento, al nacer o alrededor del nacimiento se puede identificar por alguna de estas pruebas virológicas (WHO, 2014).
Pruebas serológicas de VIH se puede utilizar para detectar la exposición entre niños menores de 18 meses de edad, pero un diagnóstico definitivo de infección VIH entre niños menores de 18 meses de edad solo se confirmará con pruebas virológicas debido a que los anticuerpos maternos cruzan la placenta hacia el feto y puede persistir por hasta 18 meses y las pruebas serológicas solo demostrarían la infección materna (WHO, 2014).
Figura 4. Algoritmo de diagnóstico infantil temprano. Adaptado WHO 2014.
INFECCIONES OPORTUNISTAS EN PACIENTES VIH POSITIVOS
Cuando la capacidad de respuesta del sistema inmunitario está seriamente comprometida, aparecen manifestaciones clínicas como las ocasionadas por infecciones oportunistas, síntomas generales y neurológicos; hasta el estado más avanzado de infección o síndrome de inmunodeficiencia adquirida, SIDA. El período desde la infección VIH hasta el diagnóstico de SIDA se encuentra entre los dos meses y 5-10 años o más, teniendo en cuenta el tratamiento con antirretrovirales, el inicio a tiempo de la profilaxis de infecciones oportunistas y el tratamiento de trastornos nutricionales, alarga este período (INS, 2014).
Se define como infección oportunista a aquella infección que ocurre con mayor frecuencia y mayor severidad en individuos cuyo sistema inmune está debilitado, incluyendo a pacientes con el virus HIV (CDC, 2017). Según el CDC, las infecciones oportunistas son menos frecuentes gracias al diagnóstico temprano y la disponibilidad de mejores tratamientos que reducen la carga viral de HIV en el cuerpo del paciente, manteniendo en consecuencia el sistema inmune más fuerte.
Son numerosas las infecciones que pueden presentarse en pacientes con diagnóstico de SIDA. El CDC enumera varias al momento de realizar el dicho diagnóstico para pacientes mayores de 13 años, las cuales se encuentran consignadas en la Tabla número.3 (INS, 2014).
Tabla 3. Infecciones de acuerdo a categorías clínicas en el diagnóstico de SIDA en pacientes mayores de 13 años.
TUBERCULOSIS
EN PACIENTES
VIH POSITIVOS
La tuberculosis (TB) es una enfermedad infecciosa y una de las principales causas de mortalidad a nivel mundial. Se ha demostrado que la probabilidad de desarrollar TB es mucho más alta entre personas infectadas con HIV, y también alta entre individuos afectados por factores de riesgos como desnutrición, diabetes, tabaquismo y consumo de alcohol.
En 2016, hubo un estimado de 374 000 muertes de individuos HIV-positivos. Un estimado de 10.4 millones enfermaron por TB en 2016 de los cuales el 10% tenían HIV (74% en África).
Los datos epidemiológicos disponibles para Colombia indican que en el 2014 se notificaron al Sivigila, 12824 casos de tuberculosis todas las formas de los cuales 2143 registraron co-infección -TB/VIH- (16.7% del total) y 339 casos con tuberculosis multidrogo resistentes (2.64% del total); según el tipo de tuberculosis, el 80,4 % de los casos corresponden a tuberculosis pulmonar y el 19,6 % a tuberculosis extrapulmonar. La incidencia de tuberculosis de todas las formas fue de 24,2 casos por 100 000 habitantes (INS, 2017). Para el 2017 este rango de incidencia continúa manteniéndose a nivel nacional.
INFECCIONES POR MICOBACTERIAS NO TUBERCULOSAS EN PACIENTES VIH POSITIVOS
Las Micobacterias No Tuberculosas (MNT) son causa importante de enfermedades pulmonares y extrapulmonares. En pacientes inmunosuprimidos la proporción de infecciones pulmonares son aproximadamente un 5% en pacientes con SIDA (Henkle & Winthrop, 2015).
Es importante distinguir entre tuberculosis, micobacteriosis o presencia de una Micobacteria banal. La distinción, debe ser realizada con la mayor celeridad posible en pacientes con SIDA. La infección es extremadamente rara en personas con cuentas de CD4 mayores de 100/ml y se debe tener una alta sospecha en personas con CD4 menor a 50/ml. En caso de tratarse de una micobacteriosis se debe tratar con un esquema diferentes a los antituberculosos.
Tabla 4. Micobacterias No tuberculosas. Adaptado de Henkle,& Winthrop, 2015 (Tomado de las Guías ATS/IDSA 2007). (R)= Raro. MAC* Complejo M.avium/intracellulare.
La pandemia mundial causada por la infección con el VIH, representa un estado de alerta para el control de la Tuberculosis.
La Tuberculosis, como problema de salud pública, debe combatirse con el diagnóstico, incluyendo pruebas de susceptibilidad, y tratamiento oportunos.
PRUEBAS DE DIAGNÓSTICO
PARA TUBERCULOSIS
Son diversos los métodos empleados para el diagnóstico de Micobacterias, en donde el cultivo es catalogado como el método Gold Standard para el diagnóstico de Tuberculosis y Micobacterias MNT.
Tabla 5. Métodos empleados para el diagnóstico de Micobacterias.
Adaptado de Corrales Ramírez, Ávila de Navia & Estupiñán Torres, 2013
Robledo J, et al. ACIN, Vol. 5 - 4, 2001
La baciloscopia en esputo tiene un límite de detección de 5x103 microorganismos/mL. El resultado positivo está relacionado con la severidad de la enfermedad: mínima (20 – 40% positividad), moderada (60 – 70%), avanzada (90 – 95%) y cavitaria/no cavitaria (98% y 70%).
En tuberculosis pulmonar el 40 - 50% de los pacientes presentan baciloscopia positiva, 10% baciloscopia negativa (Corrales Ramírez, Ávila de Navia & Estupiñán Torres, 2013).
El cultivo requiere un menor número de bacilos en la muestra (10 – 100 bacilos/ml) y su positividad depende de la viabilidad de la muestra. Es el principal método para tuberculosis extrapulmonar en donde éste continúa siendo más sensible (101 – 102 bacilos/mL) (Corrales Ramírez, Ávila de Navia & Estupiñán Torres, 2013).
VIDAS® TB-IGRA
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TUBERCULOSIS LATENTE, UN ENORME RESERVORIO PARA UNA ENFERMEDAD MORTAL
El diagnóstico de la infección por tuberculosis latente (LTBI) es una prioridad para prevenir el desarrollo de la enfermedad de la tuberculosis.
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CRIPTOCOCOSIS
EN PACIENTES
VIH POSITIVOS
Se manifiesta principalmente como meningitis o meningo-encefalitis y se caracteriza por fiebre, cefalea y compromiso del estado general. Los signos clásicos de rigidez de nuca y fotofobia son menos habituales (25-30%) que en la meningitis bacteriana aguda. El compromiso de funciones mentales superiores y del nivel de conciencia es poco frecuente y se ven más bien en etapas tardías de la enfermedad.
DIAGNÓSTICO
La presencia de Cryptococcus spp en el LCR representa la diseminación de una enfermedad sistémica, de modo que se puede tener concomitantemente fungemia con hemocultivos positivos (75%), compromiso cutáneo (similar a lesiones de Molluscum contagiosum) e invasión pulmonar. La tinción de Gram o la tinta china son positivas para levaduras pero su sensibilidad es de ~70 a 80% y depende de la carga fúngica, de modo que concentraciones de levaduras < 1.000/mL suelen acompañarse de tinciones negativas. Por otro lado, la antigenemia para Cryptococcus spp (reacción de látex) suele ser positiva en LCR y en el plasma con una sensibilidad de 90-98% Una opción es el uso FilmArray ME Panel realiza pruebas para la identificación de 14 posibles patógenos del SNC a partir del LCR (Figura 7). Los resultados de las pruebas realizadas sobre los especímenes con el FilmArray ME Panel están disponibles en aproximadamente una hora.
Figura 6. Bacterias, virus y levaduras detectados por el panel FilmArray ME
CULTIVO
La muestra debe ser colectada en tubo estéril tapa rosca, esta debe ser centrifugada procesada lo antes posible y sembrar el sedimento, si se sospecha de infección por levadura o si así lo ha identificado el FA ME, es necesario aislar la levadura en Agar columbia + 5% sangre de cordero (referencia 35094) o en Agar saboraud gentamicina cloranfenicol (referencia 43651) para el aislamiento selectivo de levaduras y mohos, estos agares han sido validados para que a partir de estos sea posible la identificación y la susceptibilidad por métodos automatizados como VITEK® 2. El cultivo tiene alto rendimiento aunque suele ser positivo sólo luego de tres a cuatro días de incubación.
IDENTIFICACIÓN
Adicional a los métodos manuales tradicionales, existen diferentes sistemas de identificación Semi-automatizados disponibles en galerías como por ejemplo: API 20 C AUX que se componen de 20 cúpulas con sustratos deshidratados que permiten realizar 19 pruebas de asimilación (figura 8) . Las cúpulas se inoculan con un medio semisólido y las levaduras sólo se reproducen si son capaces de utilizar el sustrato correspondiente, la lectura de estas reacciones se hace por comparación con un control de crecimiento y la identificación se obtiene, a partir de un código numérico, mediante un programa informático conocido como API Web. También están disponibles métodos automatizados como VITEK® 2 el cual identifica un organismo mediante una metodología basada en las características de los datos y el conocimiento acerca del organismo y las reacciones que se analizan. Se han recogido datos suficientes de cepas conocidas como para estimar las reacciones típicas de las especies solicitadas a un juego de perfiles bioquímicos discriminantes. Si no se reconoce un patrón de identificación único, se presenta una lista de organismos posibles o se determina que la cepa está fuera del alcance de la base de datos.
La presencia de Cryptococcus spp en el LCR representa la diseminación de una enfermedad sistémica, de modo que se puede tener concomitantemente fungemia con hemocultivos positivos (75%), compromiso cutáneo (similar a lesiones de Molluscum contagiosum) e invasión pulmonar. La tinción de Gram o la tinta china son positivas para levaduras pero su sensibilidad es de ~70 a 80% y depende de la carga fúngica, de modo que concentraciones de levaduras < 1.000/mL suelen acompañarse de tinciones negativas. Por otro lado, la antigenemia para Cryptococcus spp (reacción de látex) suele ser positiva en LCR y en el plasma con una sensibilidad de 90-98% Una opción es el uso FilmArray ME Panel realiza pruebas para la identificación de 14 posibles patógenos del SNC a partir del LCR (Figura 7). Los resultados de las pruebas realizadas sobre los especímenes con el FilmArray ME Panel están disponibles en aproximadamente una hora.
Figura 7. API 20 C AUX
Figura 8. Tarjetas VITEK 2
ANTIBIOGRAMA
El sistema VITEK® 2 evalúa el patrón de crecimiento de cada organismo en presencia del antimicrobiano en relación con el crecimiento registrado en el pocillo de control utilizando la tarjeta de antibiograma para levaduras AST-YS08 (Tabla 6) Para determinar la concentración inhibitoria mínima (CIM) se utilizan varios parámetros en función de las características de crecimiento observadas. El resultado de la CIM debe estar vinculado a una identificación de organismo con el fin de determinar una interpretación de categoría, según los puntos de corte establecidos, en la actualidad ninguna de las reglas internacionales EUCAST y CLIS han validado dichos puntos de corte para el genero Cryptococcus por tanto cada laboratorio define si usa el punto de corte epidemiológico u otros basados en evidencia científica. Si las tarjetas de sensibilidad no cubren el microorganismo causante de la infección, debe realizar el montaje por otros métodos validados como Etest® (bioMérieux).
Tabla 6. Antibiograma levaduras
DIAGNÓSTICO
CRYPTOSPORIDIUM
EN PACIENTES
VIH POSITIVOS
Cryptosporidium es un género de protozoos que pueden ocasionar infecciones en el estómago, intestinos y conductos biliares humanos tras la ingestión de oocitos resistentes al cloro que se han sembrado en la materia fecal y que pueden contaminar el agua potable, la utilizada para usos recreativos, o los alimentos. Cryptosporidium se encuentra entre las causas parasíticas más frecuentes de diarrea en naciones desarrolladas. Al menos 10 especies infectan a los seres humanos, siendo las más habituales C. hominis y C. parvum. Es posible la enfermedad grave en personas inmunocomprometidas, especialmente las que padecen SIDA, cuya enfermedad se resuelve con lentitud, o no se resuelve y puede ser mortal.
DIAGNÓSTICO
El diagnóstico de rutina se basa principalmente con la observación directa en el microscopia de los oocitos en un frotis de materia fecal fresca teñidos con auramina fenol o Ziehl-Neelsen modificado los cuales presentan una baja sensibilidad (Chalmers, 2011). También se utilizan coloraciones como Kinyoun MAF que tiene como desventaja que los ooquistes pueden confundirse con levadura y otros elementos fúngicos que a menudo se tiñen de rojo a púrpura con MAF (Cama, 2015). Debido a la baja sensibilidad y especificidad de las coloraciones es necesario implementar pruebas adicionales como las moleculares para la identificación del parásito.
IDENTIFICACIÓN MOLECULAR
El Panel gastrointestinal de FilmArray (GI Panel) contiene dos ensayos (Crypt 1 y Crypt 2) para detectar especies de Cryptosporidium a partir de materia fecal suspendida en el medio Cary Blair en 1 hora.
El panel GI permite la detección de aproximadamente 23 especies de Cryptosporidium diferentes, incluidas las especies más frecuentes de relevancia clínica en seres humanos (es decir, C. hominis y C. parvum), así como varias especies menos frecuentes (por ej. C. meleagridis, C. felis, C. canis, C. cuniculus, C. muris, y C. suis). Con un valor predictivo negativo del 100% y un valor predictivo positivo del 96.7%.
Figura 9. Microorganismos detectados por el panel FilmArray GI
DIAGNÓSTICO SINDRÓMICO EN PACIENTES VIH
Tanto la oportuna intervención del laboratorio como el Diagnóstico Sindrómico mediante el uso de las diferentes soluciones que bioMérieux ofrece para Diagnóstico Sindrómico en infecciones de pacientes VIH positivos: VITEK®, VITEK MS®, BioFire FilmArray®, VIDAS® B, Genotype, impactan en un mejor manejo de paciente, mejor terapia y disminución de costos hospitalarios.
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BIBLIOGRAFÍA
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